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    研域課堂:細(xì)胞傳代的辦法您做對(duì)了嗎?

    發(fā)布時(shí)間: 2019-08-23  點(diǎn)擊次數(shù): 1560次

    經(jīng)過自主研發(fā)和吞并重組不斷擴(kuò)展企業(yè)產(chǎn)品線,逐漸發(fā)展為試劑的專業(yè)制造商和電子商務(wù)集成供應(yīng)商,成為試劑職業(yè)發(fā)展的者。開端細(xì)胞傳代前,仔細(xì)檢查細(xì)胞傳代所需的儀器和試劑是否*。

     

    一:細(xì)胞與試劑方面:

    1、細(xì)胞(單層細(xì)胞,鏡檢合適)

    2、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液或MEM 培養(yǎng)液或199 等合適細(xì)胞有要求的培養(yǎng)液)

    3、滅活小牛血清、慶大霉素溶液(1 萬單位)

    4、7.5%NaHC03 溶液

    5、0.25%胰蛋白酶

    6、 PBS 洗液。

    二:實(shí)驗(yàn)小用具方面:

    1、小方瓶(100m1)

    2、克氏瓶

    3、膠塞

    4、吸管(10ml、1m1)

    5、細(xì)胞吹打管(20 ml)(以上用具需經(jīng)121℃至少15 分鐘高壓滅菌)

    6、C02 孵箱

    7、超凈臺(tái)

    8、倒置顯微鏡

    9、4℃、- 20℃冰箱
     
    三:細(xì)胞傳代的操作過程

    1、選擇細(xì)胞:鏡檢細(xì)胞,選擇成長(zhǎng)狀態(tài)杰出,細(xì)胞界限明晰,具有立體感,形態(tài)好無污染、無異常及可疑病變細(xì)胞。

    2、配制細(xì)胞培養(yǎng)液:按以下配比配制MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液100ml 內(nèi),加入滅活小牛血清10m1,慶大霉素溶液0.3m1,7.5%碳酸氫鈉溶液3ml。(僅供一般參考)。

    3、消化細(xì)胞:先用PBS 洗液沖洗細(xì)胞外表1-2 次,每次10m1,棄去洗液,向細(xì)胞瓶?jī)?nèi)加入0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,細(xì)胞瓶平放,使消化液*覆蓋細(xì)胞外表。

    4、至細(xì)胞*脫落到胰酶中:每瓶加入10m1 細(xì)胞培養(yǎng)液吹打渙散細(xì)胞,按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中,再加入10m1 細(xì)胞培養(yǎng)液重復(fù)吹打一次后分裝,然后補(bǔ)加至所需培養(yǎng)量。

    5、加塞,置于37±1℃孵箱培養(yǎng)。約2~4 天成片(由細(xì)胞接種濃度決定)。

    6、填寫傳代記載。

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