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ELISA試劑盒酶聯(lián)免疫法基本原理及注意事項
發(fā)布時間： 2016-11-07 點擊次數(shù)： 1554次ELISA試劑盒酶聯(lián)免疫法留神事項：
⒈ 正式試驗時，應(yīng)別離以陽性對照與陰性對照操控試驗條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證試驗效果的性。有時本底較高，說明有非特異性反響，可選用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
⒉ 在ELISA中，進行各項試驗條件的挑選是很首要的，其間包含：
⑴ 固相載體的挑選：很多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其辦法可所以凹孔平板、試管、珠粒等。當時常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體，在運用前均可進行挑選：用等量抗原包被，在同一試驗條件下進行反響，查詢其顯色反響是不是均一性，據(jù)此判明其吸附功能是不是超卓。
⑵ 包被抗體（或抗原）的挑選：將抗體（或抗原）吸附在固相載體外表時，央求純度要好，吸附時一般央求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時刻及其蛋白量也有必定影響，一般多選用4℃18～24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進行滴定：即用不一樣的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進行包被后，在其它試驗條件相一同，查詢陽性標本的OD值。挑選OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于大都蛋白質(zhì)來說一般為1～10μg/ml。
⑶ ⑷ 酶的底物及供氫體的挑選：對供氫體的挑選央求是價廉、安全、有明顯地顯色反響，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌效果，應(yīng)留神防護。有條件者應(yīng)運用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是當時較為滿意的供氫體。底物效果一段時刻后，應(yīng)參加強酸或強堿以間斷反響。一般底物效果時刻，以10-30分鐘為宜。底物運用液有必要新鮮制造，尤其是H2O2在臨用前參加。①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體外表，并堅持其免疫活性。
②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測守時，把受檢標本（測定其間的抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按不一樣的進程與固相載體外表的抗原或抗體起反響。用洗刷的辦法使固相載體上構(gòu)成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分隔，終究結(jié)合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量成必定的份額。參加酶反響的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩唐?，商品的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接有關(guān)，故可根據(jù)色彩反響的深淺來進行定性或定量分析。因為酶的催化頻率很高，故可很大地拓展反響效果，從而使測定辦法抵達很高的敏感度。
ELISA試劑盒可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定辦法中有3種必要的試劑：
①固相的抗原或抗體
②酶符號的抗原或抗體
③酶效果的底物。根據(jù)試劑的來歷和標本的性狀以及檢查的具備條件，可規(guī)劃出各種不一樣類型的檢查辦法。
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